如何利用振動切片機切出(chū)高存活率的(de)活體肺組織切片-競赢科儀-廣州銘信儀器有限公司

實驗一(yī / yì ／yí)：切新鮮的(de)小鼠肺

實驗樣品：小鼠肺（無病變）

所用設備：DTK-1000N振動切片機

實驗步驟

1、活殺一(yī / yì ／yí)隻老鼠，解剖後露出(chū)完整肺部；

2、從支氣管處注入2%的(de)生理鹽水沖洗肺部，直到(dào)整個(gè)肺呈現出(chū)白色狀态；

3、從支氣管處開始，取下整個(gè)肺，在(zài)支氣管口處注入低溫瓊脂，直至充滿全肺，再用生物線紮緊支氣管，防止瓊脂漏出(chū)（如圖1）；

*圖1 充滿瓊脂的(de)活體老鼠肺

4、将肺放在(zài)4度冰箱裏保存12小時(shí)；

5、從冰箱取出(chū)肺，進行修塊處理，修塊的(de)大(dà)小根據實驗要(yào / yāo)求而(ér)定，一(yī / yì ／yí)般爲(wéi / wèi)1 x 1cm左右；

6、将修好的(de)肺組織粘在(zài)切片機的(de)樣品盤中，設置切片機振動頻率爲(wéi / wèi)55Hz，進刀速度爲(wéi / wèi)20 mm/min，依次切出(chū)200μm和(hé / huò)300μm的(de)切片（如圖2和(hé / huò)圖3）

*圖2 200μm老鼠肺切片

*圖3 300μm老鼠肺切片

實驗結果：切片非常完整，肺泡、纖維等組織完整呈現出(chū)來(lái)，沒有裂紋，活性保存很好。

實驗二：切纖維化的(de)人(rén)肺

1、實驗樣品：纖維化的(de)人(rén)肺（換肺病人(rén)的(de)局部組織）

2、所用設備：DTK-1000N振動切片機

實驗步驟

1、取樣，取樣時(shí)需要(yào / yāo)避開嚴重纖維化的(de)肺組織；

2、樣品取出(chū)後浸泡在(zài)培養液（主要(yào / yāo)成分爲(wéi / wèi)氨基酸）中；

3、取出(chū)樣品置于(yú)包埋管中，在(zài)包埋管裏注入低溫瓊脂，然後将包埋管放在(zài)冰浴中，使瓊脂快速凝固（如圖4）；

*圖4 充滿瓊脂的(de)活體肺

4、修塊，去掉多餘的(de)瓊脂；

5、将修好的(de)肺組織粘在(zài)切片機的(de)樣品盤中，設置切片機振動頻率爲(wéi / wèi)50，進刀速度爲(wéi / wèi)20mm/min，依次切出(chū)200μm和(hé / huò)300μm的(de)切片（如圖5和(hé / huò)圖6）

*圖5 200μm肺切片

*圖6 300μm肺切片

實驗結果：切片非常完整，肺泡、纖維等組織完整呈現出(chū)來(lái)，沒有裂紋，活性保存很好。

總結：

老鼠肺可以(yǐ)被完整取下，所以(yǐ)可以(yǐ)采用從支氣管處注入瓊脂的(de)方式來(lái)固定，這(zhè)種固定方式的(de)好處是(shì)不(bù)會阻斷空氣中的(de)氧氣進入肺循環，從而(ér)極大(dà)的(de)增加了(le／liǎo)肺細胞的(de)活性。而(ér)對于(yú)人(rén)體肺，取樣時(shí)不(bù)能取出(chū)整個(gè)肺，無法采用往肺内灌注瓊脂的(de)固定方式，隻能采用包埋管包埋的(de)外部固定。這(zhè)要(yào / yāo)求實驗員非常快速的(de)完成整個(gè)實驗操作過程，否則，如果讓肺泡和(hé / huò)氧氣阻斷時(shí)間久了(le／liǎo)，肺細胞将會失去活性。另外，選擇性能優良的(de)振動切片機，切片時(shí)設置合适的(de)振動頻率和(hé / huò)進刀速度，也(yě)是(shì)确保高活性切片的(de)極爲(wéi / wèi)重要(yào / yāo)的(de)因素。

DTK-1000N振動切片機

主要(yào / yāo)用于(yú)切割沒有冰凍的(de)新鮮或固定好的(de)動植物組織，尤其适合腦組織的(de)切片。